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高爾基染色法的基本原理?12
高爾基染色法(Golgi staining)是一種經(jīng)典的染色方法,主要用于觀察?神經(jīng)元和?膠質細胞的形態(tài)結構。?其技術原理主要依賴于染色劑的特異性親和性和細胞的嗜銀特性。?高爾基染色試劑盒中的染色劑具有特異性親和性,能夠與神經(jīng)元和膠質細胞中的特定成分(如蛋白質、核酸等)結合,從而在顯微鏡下呈現(xiàn)出清晰的形態(tài)結構。此外,神經(jīng)元和膠質細胞具有嗜銀特性,這使得它們在高爾基染色過程中能夠被特定的銀鹽溶液(如重鉻酸鉀、鉻酸鉀和氯化汞等)浸潤并標記。經(jīng)過一系列化學反應后,這些銀鹽會在細胞內(nèi)形成可見的黑色沉淀物,從而清晰地勾勒出神經(jīng)元的軸突、樹突以及樹突棘等細微結構。
高爾基染色法的操作步驟
1.取材:將老鼠殺死后,立刻取腦組織置于固定液中固定48小時以上。
2.高爾基染色:將腦組織切成2-3毫米厚的組織塊,用生理鹽水漂洗幾遍,置于高爾基染液中浸泡14天(每隔3天換一次新染液)。
3.組織處理:蒸餾水浸洗3次,倒入80%的冰醋酸浸沒組織,過夜,待組織變軟后蒸餾水洗,置于30%的蔗糖中。
4.切片:用振蕩切片機將組織切成100微米,貼在明膠玻片上,晾干。
5.顯影定影:晾干后的組織玻片以濃氨水處理15分鐘,蒸餾水洗1分鐘,酸性堅膜定影液處理15分鐘,蒸餾水洗3分鐘,晾干,甘油明膠封片。
6.顯微鏡鏡檢:用顯微鏡觀察并采集圖像。
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