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免疫熒光染色
1、用PBS輕洗組織載玻片兩次,切記輕緩,防止切片從載玻片上脫落,必要時靜泡去除OCT膠即可;
2、固定:加入4%PFA固定20min;
3、破膜:0.3% TritonX-100/PBS 破膜30min;
4、封閉:加入blocking buffer ,置于室溫下1h;
5、一抗孵育:加入一抗,在4度孵育過夜或在室溫孵育3h;用PBS輕緩清洗一抗 3 次,10min/次;
6、二抗孵育:加入二抗,室溫孵育1h;用PBS輕緩清洗二抗3 次,10min/次;
7、DAPI 染色:加入DAPI溶液,室溫5min;用PBS清洗DAPI 3 次,10min/次;
8、封片:在載玻片上滴加封閉液,覆上蓋玻片,注意趕走氣泡,用指甲油封片;
9、熒光顯微鏡下拍片。
H & E 染色
1. 準備:將生理鹽水濕潤的紗布放置在培養(yǎng)皿上,培養(yǎng)皿放置在冰上;
2. 取材:快速取下肌肉標本,將其放置在紗布上;
3. 標本處理:將肌肉標本浸入經(jīng)液氮預冷的異戊烷內(nèi)30-60s,處理后的肌肉標本放入液氮中保存;
4. 凍切片:肌肉標本切片厚度10um,將其貼在載玻片上,-20℃保存;
(注意:實驗過程中避免肌肉標本凍融)
5.蘇木素染1 min(染液回收)——水洗;
6.1%伊紅染1 min(染液回收)——水洗;
7.80%酒精——90%酒精——100%酒精——100%酒精—— 二甲苯
8.樹膠封片。
尼氏染色
1、冰凍切片一定要在室溫下干燥至少1小時,否則在后續(xù)步驟中容易脫片;
2、slice置于雙蒸水中,靜置2min;
3、slice浸入nissl染液中,于37度孵育30min,切片越厚,孵育時間宜延長;
4、染液孵育結(jié)束后,蒸餾水浸洗2次,每次數(shù)秒;
5、將slice依次浸入95%乙醇2 次,2min/次,二甲苯中透明2 次,5 min/次;
6、中性樹膠封片。
注意:千萬不要等到二甲苯干了再封片,否則,組織會變成棕黑色;未干情況下封片還可幫助稀釋中性樹膠,減少氣泡。
文章出自:肥大細胞染色實驗 想了解更多請關(guān)注:http://gujratmining.com/
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